客户新作 | iScience：以DRUG-seq2为核心的GPS平台，用于分子胶高通量筛选

分子胶降解剂（MGD）通过重塑E3泛素连接酶的底物识别界面，招募并降解传统上缺乏可成药口袋的蛋白质。现有发现手段各有结构性限制：蛋白组学（如TMT）可全景呈现蛋白丰度变化，但成本与通量难以支撑一级筛选；生化实验（AlphaLISA、TR-FRET）依赖纯化蛋白，且要求预先指定靶点与E3；表型筛选无法区分降解机制与常规抑制活性，机制去卷积周期长。核心矛盾在于：初级筛选需要高通量与低成本，机制确认需要高信息量，二者此前难以在同一流程内兼得。

GPS将两个模块整合为一体。其一是DRUG-seq2转录组流程：直接裂解、免RNA纯化、多重复用建库。其二是CRBN野生型/敲除（WT/KO）同源细胞对构成的遗传判定基准。117个化合物（11个商品化分子胶作基准对照，106个自主合成候选）以1 μM处理24小时，96孔板、生物学三重复。质控上以板内DMSO孔两两Pearson相关（r<0.95剔除）构建“零点”基线，适配直接裂解体系对弱信号的检出要求。

判别逻辑明确：真正的CRBN分子胶，其转录组效应在CRBN敲除后应当消失。据此，化合物被划分为四类——WT中效价高且KO后归零的为一级强效分子胶；WT信号弱但具协调的通路位移、且KO后消失的为二级种子化合物；KO后信号不变的走E3非依赖机制，属排除对象；两组均无信号的为惰性分子。

一级代表性命中为LC-02-047-P1：TMT定量蛋白组学显示CSNK1A1（CK1α）显著下调；在Hep3B、Huh7、HepG2三种肝癌细胞中经免疫印迹验证近完全的CK1α降解；GSPT1不可降解突变体（G575N）交叉实验排除GSPT1通路参与，确认为新型的CRBN依赖性CK1α降解分子胶。

二级化合物LC-02-051的定位过程同样有代表性：其在DEG分析中不显著，但整合六套主流基因集的定制GSEA文库捕获到协调的通路位移，且CRBN敲除后信号消失，被定性为值得结构优化的种子化合物——这类分子在以DEG为唯一读出的筛选中会被直接判为无活性。